Hola a todos, estos días os voy a explicar las técnicas de tinción más utilizadas en los laboratorios de ánalisis clínicos en el área de microbiología empezamos con la tinción GRAM. Debido a su importancia en taxonomía bacteriana y a que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias, describiremos aquí con algún detalle la tinción de Gram y las interpretaciones que actualmente se hacen sobre el porqué de su funcionamiento. Las células fijadas al calor sobre un portaobjetos se tiñen, primero con una solución de cristal violeta (otros colorantes básicos no son tan efectivos) y son lavadas después para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las células, tanto las grampositivas como las gramnegativas, están teñidas de azul. El portaobjetos se cubre entonces con una solución de yodo-yoduro potásico. El ingrediente activo es aquí el I2; el KI simplemente hace soluble el I2 en agua. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo tanto las células grampositivas como las gramnegativas se encuentran en la misma situación. Se lleva a cabo después la decoloración, usando una mezcla de alcohol-acetona, sustancias en las que es soluble el complejo I2-cristal violeta. Algunos organismos (grampositivos) no se decoloran, mientras que otros (gramnegativos) lo hacen. La diferencia esencial entre esos dos tipos de células está por tanto en su resistencia a la decoloración; esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipídico y disuelve la membrana exterior de la pared de la célula (y también puede dañar la membrana citoplásmica a la que se une peptidoglicano). La delgada capa de peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal violeta-yodo y la célula se decolora. Las células grampositivas, a causa de sus paredes celulares más espesas (tienen más peptidoglicano y menos lípido), no son permeables al disolvente ya que éste deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo así el espacio entre las moléculas y provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared celular. Después de la decoloración las células grampositivas son todavía azules, pero las gramnegativas son incoloras. Para poner de manifiesto las células gramnegativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina básica. Después de la coloración de contraste las células gramnegativas son rojas, mientras que las grampositivas permanecen azules. Deben destacarse algunos aspectos cruciales de la tinción de Gram: 1) El tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento con yodo. El yodo por sí solo tiene poca afinidad con las células. 2) La decoloración debe realizarse con poca agua para evitar que pierdan la tinción las células grampositivas. EI proceso de decoloración debe ser corto y es esencial un cálculo preciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios. 3) Cultivos más viejo de 24 horas pueden perder su habilidad de retener el complejo cristal violeta - yodo. El carácter de grampositivo no es siempre un fenómeno del todo o nada. Algunos organismos son más grampositivos que otros y algunos son gram-variables, es decir, unas veces grampositivos y otras gramnegativos.
Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844.
La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio bacteriológico y con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. Su utilidad práctica es indiscutible y en el trabajo microscópico de rutina del Laboratorio de Microbiología las referencias a la morfología celular bacteriana (cocos,bacilos,positivos,negativos, etc) se basan justamente en la tinción de GRAM.
Descripta en forma breve, la secuencia de la tinción es la siguiente: el Frotis fijado con calor se tiñe 1 min con Violeta Cristal, se lava con agua, se cubre con solución Yodada durante 1 min y se lava de nuevo con agua, decolorar con mezcla alcohol etílico/acetona. Escurrir y cubrir con Safranina (color de contraste) durante 20 seg. Lavar y secar.
Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, grampositivas y gramnegativas (en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan dos grupos morfologicos distintos de bacterias).
Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias contitutivas en la estructura de su pared. La pared de la célula bacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo así como para prevenir la lisis osmótica. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared de la célula gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectandas de peptidoglicano así como algo de ácido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared de la célula gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la célula gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Sólo 10% - 20% de la pared de la célula gram-negativa es peptidoglicano.
En la imagen Bacterias Gram + (arriba) y Gram - (abajo)
Más adelante os explicaré como se realiza la tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) y la morfología de los microorganismos.
Un saludo a todos.
sábado, 26 de enero de 2008
Tipos de tinciones (tinción gram)
miércoles, 23 de enero de 2008
Microscopio electrónico (M.E)
Como os habia prometido anteriormente os explicaré un poco el funcionamiento de un microscopio electronico.
Un microscopio electrónico es aquél que utiliza electrones en vez de fotones o luz visible para formar imágenes de objetos diminutos. Los microscopios electrónicos permiten alcanzar una capacidad de aumento muy superior a los microscopios convencionales (hasta 500.000 aumentos comparados con los 1000 de los mejores microscopios ópticos) debido a que la longitud de onda de los electrones es mucho menor que la de los fotones.
Un microscopio electrónico funciona con un haz de electrones generados por un cañón electrónico, acelerados por un alto voltaje y focalizados por medio de lentes magnéticas (todo ello al alto vacío ya que los electrones son absorbidos por el aire). Los electrones atraviesan la muestra (debidamente deshidratada) y la amplificación se produce por un conjunto de lentes magnéticas que forman una imagen sobre una placa fotográfica o sobre una pantalla sensible al impacto de los electrones que transfiere la imagen formada a la pantalla de un ordenador. Los microscópios electrónicos sólo se pueden ver en blanco y negro puesto que no utilizan la luz, pero se le pueden dar colores en el ordenador. Como se puede apreciar su funcionamiento es semejante a un monitor monocromático.
Existen dos tipos principales de microscopios electrónicos: Microscopio electrónico de transmisión Microscopio electrónico de barrido
En el estudio de los circuitos integrados se suele utilizar el microscopio electrónico debido a una curiosa propiedad: Como el campo eléctrico modifica la trayectoria de los electrones, en un circuito integrado en funcionamiento, visto bajo el microscopio electrónico, se puede apreciar el potencial al que está cada elemento del circuito.
lunes, 21 de enero de 2008
Microscopio óptico
Ahora os voy a explicar los 2 microscopios más utilizados el microscopio optico y el microscopio electronico. Sistema óptico: lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.
Funcion del microscopio óptico
Las células son las unidades básicas de los seres vivos. La mayoría de ellas son de pequeño tamaño por lo que es indispensable el uso de instrumentos como los microscopios para su visualización. La exigencia del estudio de las estructuras celulares a llevado a la invencion y mejoramiento practico de esta herramienta muy utilizada en las disciplinas de la biologia y la medicina incorporandose ahora en las ciencias exactas para la caracterizacion de muestras quimicas. En la tabla sigiente se muestra el rango de resolucion comparados con otras tecnicas.
Partes del microscopio óptico y sus funciones
Objetivo: lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de esta.
Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
Diafragma: regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
Cuerpo.
Fase Mecánica.
Control de la fase mecánica.
Control de enfoque .
sábado, 19 de enero de 2008
Extracción de sangre ppt
Para que esto quede totalmente aclarado os voy enseñar los pasos a seguir para la extracción con este powerpoint.
Leer toda la nota...
Extracción de sangre
Os dejo un video de como realiza una extracción de sangre un técnico.
lunes, 14 de enero de 2008
Formula leucocitaria
Es una prueba que mide el porcentaje de cada tipo de glóbulo blanco (GB) que una persona tiene en la sangre y también revela si hay algunas células inmaduras o anormales.
Nombres alternativos
Diferencial sanguíneo; Fórmula leucocítica o recuento leucocitario
Forma en que se realiza el examen
El médico extrae la sangre de la vena y la recoge en un recipiente hermético.
En los bebés o niños pequeños, la sangre se toma de una punción en el talón o en el dedo de la mano y se recoge en un pequeño tubo de vidrio, sobre un portaobjetos o sobre una tira reactiva.
Se puede aplicar un algodón o un vendaje para detener cualquier sangrado.
Un especialista del laboratorio toma una gota de sangre de la muestra y la extiende sobre un portaobjetos de vidrio. La extensión se tiñe con un tinte especial, el cual ayuda a establecer la diferencia entre diversos tipos de glóbulos blancos.
Normalmente, aparecen cinco tipos de glóbulos blancos, también llamados leucocitos, en la sangre:
Neutrófilos 
Linfocitos (Células B y T) 
Monocitos 
Eosinófilos 
Basófilos
Una computadora o el médico cuenta el número de cada tipo de célula. El examen muestra si el número de células está en la proporción apropiada entre sí y si hay más o menos cantidad de un tipo de célula.
Preparación para el examen
No se necesita preparación especial.
Lo que se siente durante el examen:
Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado, mientras que otras sólo sienten un pinchazo o sensación de picadura. Después, puede haber una sensación pulsátil.
Razones por las que se realiza el examen:
Este examen se hace para diagnosticar una infección, anemia y leucemia e igualmente se utiliza para ver si el tratamiento para cualquiera de estas afecciones está funcionando.
Valores normales
Neutrófilos: 40 a 60%
Linfocitos: 20 a 40%
Monocitos: 2 a 8%
Eosinófilos: 1 a 4%
Basófilos: 0,5 a 1%
En banda: 0 a 3%
Significado de los resultados anormales
Cualquier infección o estrés agudo ocasiona un aumento en la producción de GB. Los conteos altos de glóbulos blancos pueden deberse a inflamación, una respuesta inmunitaria o hemopatías como la leucemia.
Es importante saber que el aumento anormal de un tipo de leucocito puede causar una disminución en los porcentajes de otros tipos de glóbulos blancos.
Un aumento del porcentaje de neutrófilos puede deberse a:
Infección aguda
Eclampsia
Gota
Leucemia mielógena
Artritis reumatoidea
Fiebre reumática
Estrés agudo
Tiroiditis
Traumatismo
Una disminución en el porcentaje de neutrófilos puede deberse a:
Anemia aplásica
Quimioterapia
Gripe
Infección bacteriana generalizada
Radioterapia
Un aumento en el porcentaje de linfocitos puede deberse a:
Infección bacteriana crónica
Hepatitis infecciosa
Mononucleosis infecciosa
Leucemia linfocítica
Mieloma múltiple
Infección viral (como mononucleosis infecciosa, paperas, sarampión)
Recuperación de una infección bacteriana
Una disminución en el porcentaje de linfocitos puede deberse a:
Quimioterapia
Infección por VIH
Leucemia
Radioterapia
Sepsis
Un aumento del porcentaje de monocitos puede deberse a:
Enfermedad inflamatoria crónica
Infección parasitaria
Tuberculosis
Infección viral (por ejemplo, mononucleosis infecciosa, paperas, sarampión)
Un aumento en el porcentaje de eosinófilos puede deberse a:
Reacción alérgica
Infección parasitaria
Enfermedad de Hodgkin
Una disminución en el porcentaje de basófilos puede deberse a:
Reacción alérgica aguda.
Cuáles son los riesgos
Sangrado excesivo
Desmayo o sensación de mareo
Hematoma (acumulación de sangre debajo de la piel)
Infección (un riesgo leve en cualquier momento que se presente ruptura de la piel)
Punciones múltiples para localizar las venas
Consideraciones especiales
Las venas y arterias varían en tamaño de un paciente a otro y de un lado del cuerpo a otro, por esta razón puede ser más difícil obtener una muestra de sangre de algunas personas que de otras.
